Composición multivalente de conjugados de polisacárido neumocócico-proteína.

Un procedimiento de preparación de una composición inmunogénica multivalente que comprende 13 conjugados distintos de polisacárido-proteína junto con un vehículo fisiológicamente aceptable,

en el que cada uno de los conjugados contiene un polisacárido capsular diferente conjugado con una proteína transportadora, y en el que los polisacáridos capsulares son preparados a partir de los serotipos 1, 3, 5, 6A, 6B, 7F, 9V,14,18C, 19A, 19F y 23F de Streptococcus pneumoniae, en el que dicho conjugado de polisacárido de serotipo 3 - proteína es fabricada de acuerdo con un procedimiento que comprende:

(a) hacer reaccionar un polisacárido de serotipo 3 purificado con un ácido débil dando como resultado un polisacárido de serotipo 3 hidrolizado;

(b) hacer reaccionar el polisacárido de serotipo 3 hidrolizado con un agente oxidante en presencia de cationes bivalentes dando como resultado un polisacárido de serotipo 3 activado en el que el agente oxidante es ácido peryódico y los cationes bivalentes son Mg2+ o Ca2+;

(c) combinar el polisacárido de serotipo 3 activado con una proteína transportadora;

(d) hacer reaccionar el polisacárido de serotipo 3 activado y la proteína transportadora combinados con un agente reductor, dando como resultado un conjugado de polisacárido de serotipo 3: proteína transportadora; y

(e) proteger los aldehídos que no han reaccionado en el conjugado de polisacárido de serotipo 3: proteína transportadora dando como resultado un conjugado inmunogénico que comprende el polisacárido de serotipo 3 de Streptococcus pneumoniae unido covalentemente a una proteína transportadora;

y en el que después de que los glucoconjugados son purificados, estos son combinados para formular la composición inmunogénica.

Composicion multivalente de conjugados de polisacarido neumococico-proteina

Campo de la invención La presente invencion se refiere en general al campo de la medicina, y especificamente al de la microbiologia, inmunologia, vacunas y a la prevencion, por inmunizacion, de infecciones ocasionadas por un patogeno bacteriano.

Antecedentes de la invención Streptococcus pneumoniae es una causa principal de meningitis, neumonia y enfermedades invasivas graves en bebes y en ninos pequenos en todo el mundo. Las vacunas de polisacaridos neumococicos multivalentes se han autorizado durante muchos anos y han demostrado ser valiosas en la prevencion de enfermedades neumococicas en adultos de edad avanzada y en pacientes de alto riesgo. Sin embargo, los bebes y los ninos pequenos responden mal a la mayoria de los polisacaridos neumococicos. La vacuna conjugada neumococica 7-valente (7vPnC, Prevnar®) fue la primera de este tipo que demostro ser altamente inmunogenica y eficaz contra enfermedades invasivas y otitis media en bebes y en ninos pequenos. Actualmente esta vacuna esta autorizada en muchos paises en todo el mundo. Prevnar contiene los polisacaridos capsulares de los serotipos 4, 68, 9V, 14, 18C, 19C y 23F, cada uno conjugado con una proteina transportadora denominada CRM197. Prevnar protege aproximadamente el 8090%, 60-80% y 40%-80% de las enfermedades neumococicas invasivas (ENI) en los Estados Unidos, Europa y otras regiones del mundo, respectivamente [1, 2]. Como se esperaba, datos de observaciones recogidos durante los anos posteriores a la introduccion de Prevnar han demostrado claramente una reduccion de enfermedades neumococicas invasivas en bebes en los Estados Unidos (FIG. 1) [3, 4].

La vigilancia de ENI realizada en bebes en los Estados Unidos antes de la introduccion de Prevnar demostro que una parte significativa de enfermedades debidas a los serogrupos 6 y 19 se debia a los serotipos 6A (aproximadamente una tercera parte) y 19A (aproximadamente una cuarta parte) [5, 6]. La observacion de enfermedades neumococicas invasivas realizada en los Estados Unidos despues de obtener la licencia de Prevnar sugiere que una gran carga de enfermedad todavia puede atribuirse a los serotipos 6A y 19A (FIG. 1) [3]. Ademas, estos dos serotipos representan mas casos de enfermedades invasivas que los serotipos 1, 3, 5 y 7F, combinados (8, 2 frente a 3, 3 casos/100.000 ninos de 2 anos y menores) . Ademas, los serotipos 6A y 19A estan asociados con altos indices de resistencia a antibioticos (FIG. 2) [7, 8, 9]. Aunque a medida que se inmunizan mas ninos es posible que la proteccion cruzada de serogrupos de como resultado una disminucion de enfermedades ocasionadas por los serotipos 6A y 19A, existen pruebas que sugieren que habra un limite a la disminucion, y que permanecera una carga significativa de enfermedades debida a estos serotipos (vease mas adelante) .

Dada la carga relativa y la importancia de enfermedades neumococicas invasivas debida a los serotipos 1, 3, 5, 6A, 7F y 19A, la adicion de estos serotipos a la formulacion de Prevnar aumentaria la proteccion para enfermedades invasivas a > 90% en los Estados Unidos y en Europa, y tan alta como 70%-80% en Asia y America Latina. Esta vacuna ampliaria significativamente la proteccion mas alla de Prevnar, y para los serotipos 6A y 19A proporcionaria una proteccion que no seria dependiente de las limitaciones de la proteccion cruzada de serogrupos.

Los documentos WO 2006/110381 y US 2006228380 desvelan, entre otras cosas, un procedimiento para producir un conjugado de polisacarido de serotipo 3 de Streptococcus pneumoniae unido covalentemente a una proteina transportadora que comprende una etapa de oxidacion usando per y odato de sodio.

Sumario de la invención La presente descripcion proporciona en general una composicion inmunogenica multivalente que comprende 13 conjugados distintos de polisacarido-proteina, en la que cada uno de los conjugados contiene un polisacarido capsular de un serotipo de Streptococcus pneumoniae diferente conjugado con una proteina transportadora, junto con un vehiculo fisiologicamente aceptable. Opcionalmente, en la formulacion se incluye un adyuvante, tal como un adyuvante basado en aluminio. Mas especificamente, la presente descripcion proporciona una composicion conjugada neumococica 13-valente (13vPnC) que comprende los siete serotipos (4, 68, 9V, 14, 18C y 23F) incluidos en la vacuna 7vPnC mas seis serotipos adicionales (1, 3, 5, 6A, 7F y 19A) .

La presente invencion tambien proporciona una composicion inmunogenica multivalente, en la que los polisacaridos capsulares son de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 68, 7F, 9V, 14, 18C, 19A y 23F de Streptococcus pneumoniae y la proteina transportadora es CRM197.

La presente descripcion proporciona adicionalmente una composicion inmunogenica multivalente, en la que los polisacaridos capsulares son de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 68, 7F, 9v, 14, 18C, 19A y 23F de Streptococcus pneumoniae, la proteina transportadora es CRM197 y el adyuvante es un adyuvante basado en aluminio, tal como fosfato de aluminio, sulfato de aluminio e hidroxido de aluminio. En una realizacion particular de la invencion, el adyuvante es fosfato de aluminio.

La presente descripcion tambien proporciona una composicion inmunogenica multivalente, que comprende conjugados de polisacarido-proteina junto con un vehiculo fisiologicamente aceptable, en el que cada uno de los conjugados comprende un polisacarido capsular de un serotipo de Streptococcus pneumoniae diferente conjugado con una proteina transportadora, y los polisacaridos capsulares se preparan a partir del serotipo 3 y de al menos un serotipo adicional.

En una realizacion de esta composicion inmunogenica multivalente, el serotipo adicional se selecciona del grupo que consiste en los serotipos 1, 4, 5, 6A, 68, 7F, 9V, 14, 18C, 19A y 23F. En otra realizacion, la proteina transportadora es CRM197. En otra realizacion adicional, la composicion comprende un adyuvante, tal como adyuvante basado en aluminio seleccionado de fosfato de aluminio, sulfato de aluminio e hidroxido de aluminio. En una realizacion particular el adyuvante es fosfato de aluminio La presente descripcion tambien proporciona una composicion inmunogenica multivalente, que comprende conjugados de polisacarido-proteina junto con un vehiculo fisiologicamente aceptable, en el que cada uno de los conjugados comprende un polisacarido capsular de un serotipo de Streptococcus pneumoniae diferente conjugado con una proteina transportadora, y los polisacaridos capsulares se preparan a partir de los serotipos 4, 68, 9V, 14, 18C, 19F, 23F y de al menos un serotipo adicional.

En una realizacion de esta composicion inmunogenica multivalente, el serotipo adicional se selecciona del grupo que consiste en los serotipos 1, 3, 5, 6A, 7F y 19A. En otra realizacion, la proteina transportadora es CRM197. En otra realizacion adicional, la composicion comprende un adyuvante, tal como un adyuvante basado en aluminio seleccionado de fosfato de aluminio, sulfato de aluminio e hidroxido de aluminio. En una realizacion particular, el adyuvante es fosfato de aluminio.

La presente descripcion tambien proporciona un procedimiento para inducir una respuesta inmunitaria contra un conjugado de polisacarido capsular de Streptococcus pneumoniae, que comprende administrar a un ser humano una cantidad inmunologicamente eficaz de cualquiera de las composiciones inmunogenicas que acaban de describirse.

La presente descripcion tambien proporciona que cualquiera de las composiciones inmunogenicas, administradas como una sola dosis de 0, 5 ml, se formule para contener: 2 Ig de cada sacarido, excepto para 68 que es de 4 Ig; aproximadamente 29 Ig de proteina transportadora CRM197; 0, 125 mg de adyuvante de aluminio elemental (0, 5 mg de fosfato de aluminio) ; y tampon de cloruro de sodio y succinato de sodio como excipientes.

Tambien se proporcionan procedimientos para fabricar un conjugado inmunogenico que comprende el polisacarido de serotipo 3 (Pn 3) de Streptococcus pneumoniae unido covalentemente a una proteina transportadora. En una realizacion, el procedimiento comprende (i) hacer reaccionar el polisacarido Pn 3 purificado con un acido suave dando como resultado un polisacarido Pn 3 hidrolizado; (ii) hacer reaccionar el polisacarido Pn 3 hidrolizado con un agente oxidante en presencia de cationes bivalentes dando como resultado un polisacarido Pn 3 activado; (iii) combinar el polisacarido Pn 3 activado con una proteina transportadora; (iv) hacer reaccionar el polisacarido Pn 3 activado y la proteina transportadora combinados, con un agente reductor dando como resultado un conjugado de polisacarido Pn 3: proteina transportadora y (v) proteger los aldehidos que no han reaccionado en el conjugado de polisacarido Pn 3: proteina transportadora... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de preparacion de una composicion inmunogenica multivalente que comprende 13 conjugados distintos de polisacarido-proteina junto con un vehiculo fisiologicamente aceptable, en el que cada uno de los conjugados contiene un polisacarido capsular diferente conjugado con una proteina transportadora, y en el que los polisacaridos capsulares son preparados a partir de los serotipos 1, 3, 5, 6A, 68, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F de Streptococcus pneumoniae, en el que dicho conjugado de polisacarido de serotip.

3. proteina es fabricada de acuerdo con un procedimiento que comprende:

(a) hacer reaccionar un polisacarido de serotipo 3 purificado con un acido debil dando como resultado un polisacarido de serotipo 3 hidrolizado;

(b) hacer reaccionar el polisacarido de serotipo 3 hidrolizado con un agente oxidante en presencia de cationes bivalentes dando como resultado un polisacarido de serotipo 3 activado en el que el agente oxidante es acido per y odico y los cationes bivalentes son Mg2+ o Ca2+;

(c) combinar el polisacarido de serotipo 3 activado con una proteina transportadora;

(d) hacer reaccionar el polisacarido de serotipo 3 activado y la proteina transportadora combinados con un agente reductor, dando como resultado un conjugado de polisacarido de serotipo 3: proteina transportadora; y

(e) proteger los aldehidos que no han reaccionado en el conjugado de polisacarido de serotipo 3: proteina transportadora dando como resultado un conjugado inmunogenico que comprende el polisacarido de serotipo 3 de Streptococcus pneumoniae unido covalentemente a una proteina transportadora;

y en el que despues de que los glucoconjugados son purificados, estos son combinados para formular la composicion inmunogenica.

2. El procedimiento de la reivindicacion 1, que adicionalmente comprende purificar el polisacarido de serotipo 3 activado antes de combinar con la proteina transportadora.

3. El procedimiento de la reivindicacion 1, que adicionalmente comprende co-liofilizar el polisacarido de serotipo 3 activado y la proteina transportadora combinados antes de la reaccion con el agente reductor.

4. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que el acido debil es acido acetico.

5. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que el agente reductor es cianoborohidruro de sodio

6. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que la proteccion de los aldehidos que no han reaccionado comprende hacer reaccionar el conjugado de polisacarido de serotipo 3: proteina transportadora con borohidruro de sodio.

7. Un procedimiento de preparacion de una composicion inmunogenica multivalente que comprende 13 conjugados distintos de polisacarido-proteina junto con un vehiculo fisiologicamente aceptable, en el que cada uno de los conjugados contiene un polisacarido capsular diferente conjugado con una proteina transportadora, y en el que los polisacaridos capsulares son preparados a partir de los serotipos 1, 3, 5, 6A, 68, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F de Streptococcus pneumoniae, en el que dicho conjugado de polisacarido de serotip.

3. proteina es fabricada de acuerdo con un procedimiento que comprende:

(a) hacer reaccionar un polisacarido de serotipo 3 purificado con acido acetico dando como resultado un polisacarido de serotipo 3 hidrolizado;

(b) hacer reaccionar el polisacarido de serotipo 3 hidrolizado con acido per y odico en presencia de MgCl2 dando como resultado un polisacarido de serotipo 3 activado;

(c) purificar el polisacarido de serotipo 3 activado;

(d) combinar el polisacarido de serotipo 3 activado con una proteina transportadora;

(e) co-liofilizar el polisacarido de serotipo 3 activado y la proteina transportadora combinados;

(f) hacer reaccionar el polisacarido de serotipo 3 activado y la proteina transportadora co-liofilizados con cianoborohidruro de sodio, dando como resultado un conjugado de polisacarido de serotipo 3: proteina transportadora; y

(g) proteger los aldehidos que no han reaccionado en el conjugado de polisacarido de serotipo 3: proteina transportadora con borohidruro de sodio dando como resultado un conjugado inmunogenico que comprende el polisacarido de serotipo 3 de Streptococcus pneumoniae unido covalentemente a una proteina transportadora;

y en el que despues de que los glucoconjugados son purificados, estos son combinados para formular la composicion inmunogenica.

8. El procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que como proteina transportadora se usa CRM197.

9. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 8, en el que dicha composicion inmunogenica multivalente, comprende adicionalmente un adyuvante.

10. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 9, en el que el adyuvante es un adyuvante basado en aluminio.

11. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 10, en el que el adyuvante es seleccionado del grupo que consiste en fosfato de aluminio, sulfato de aluminio e hidroxido de aluminio.